以過濾海水（水溫15℃、pH8.1、鹽度27%）為激活液（下同），精液與激活液混合后在顯微鏡下觀察精子活力（激活率、活動時間和壽命）。激活率為給定視野中被激活精子的數(shù)量占全部精子數(shù)量的百分比；運(yùn)動時間是指精子自激活開始至90%的精子原地顫動為止所經(jīng)歷的時間；精子的壽命指精子從激活開始至90%的精子停止運(yùn)動的時間。實(shí)驗重復(fù)3次。
稀釋液種類對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗分別以HBSS、MPRS、Cortland液為稀釋液（如表一），以10%EG為抗凍劑（抗凍劑為終濃度，下同）配制抗凍液；將精液與抗凍液按1︰3比例混勻，4℃平衡30min；將平衡后的精液-抗凍液混合物分裝入0.25mL麥細(xì)管中，然后用兩步降溫法（即將盛精麥細(xì)管平放在自制簡易降溫裝置的液氮面上7.5cm處，停留10min后投入液氮中）保存。12h后，將麥細(xì)管從液氮中快速取出，于40℃水浴中溶化后檢測精子激活率。

稀釋比例對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗以10%EG為抗凍劑、Cortland液為稀釋液配制抗凍液，將精液與抗凍液按1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：7、1：9混勻，按前文方法冷凍保存精子及解凍與激活率檢測。
抗凍劑種類及濃度對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗以5%、10%、15%及20%四個濃度的DMSO、Gly、EG、PG為抗凍劑、Cortland液為稀釋液配制抗凍液，將精液與抗凍液按1︰3混勻，然后冷凍保存精子及解凍與活力檢測。